EXTRACCIÓN DE ADN Y OBSERVACIÓN AL MICROSCOPIO

Extracción de ADN

Aunque el objetivo fundamental de esta práctica es utilizar unas sencillas técnicas (extracción, filtración, precipitación y tinción) para poder extraer el ADN de un tejido animal y por el aspecto que presenta, confirmar su estructura fibrilar, también hemos podido confirmar a partir de la enorme longitud de las fibras extraídas que en el núcleo el ADN se encuentra superenrollado o replegado.

El siguiente enlace os permitirá descargaros los protocolos de la práctica, en castellano y en euskara, pero para facilitar la lectura vamos a resumir el procedimiento que hemos seguido en el laboratorio.

    • Cortamos el filete de hígado de ternera, con una tijera, en trocitos pequeños, y los introducirlos en un mortero, añadimos 50 cm3 de agua y trituramos el material hasta que quede una masa homogénea y semilíquida.

    • Filtramos la mezcla obtenida con un colador y repetimos la operación hasta  que el sobrenadante no contenga partículas sólidas (fibras conjuntivas, células musculares, vasos sanguíneos, etc…).

    • En una probeta recogemos 20 cm3 de líquido y añadimos un volumen igual de detergente con el fin de romper las membranas plasmáticas y nucleares. Agitamos la mezcla suavemente con una varilla de vidrio, y dejamos reposar cinco minutos.

    • A continuación añadimos un volumen igual de zumo de piña, que provoca la separación entre el ADN y las proteínas al formar un complejo con estas últimas.

    • Para terminar la extracción, añadimos lentamente resbalando por las paredes de la probeta, mediante una pipeta, 50 cm3  de alcohol etílico de 96º frío, de manera que se formen dos capas. Introducimos con cuidado una varilla de vidrio, y la rotamos suavemente y en la misma dirección. Se observa la formación de unos filamentos blancos de ADN en la interfase, que se van enganchando y enrollando a la varilla.

Filamentos de ADN

    • Con la misma varilla depositamos algunos de estos filamentos sobre un porta, añadimos unas azul de metileno, y dejamos que se tiñan durante unos cinco minutos. A continuación, lavamos la preparación con agua destilada, cuidando de no arrastrar las fibras de ADN, secamos la preparación y observamos al microscopio. Las fibras de ADN presentan una coloración azul.

ADN azul metileno

Si queréis ver más fotos de esta práctica, pinchar en este enlace de Picasa.

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2 comentarios el “EXTRACCIÓN DE ADN Y OBSERVACIÓN AL MICROSCOPIO

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